MacsQuant Tyto, cytomètre en flux trieur de cellules : un trieur « clé en main » en conditions stériles et garantissant la fonctionnalité des cellules

Le tri par cytométrie en flux est une technologie performante utilisée pour de nombreuses applications en recherche. Le tri par cytométrie en flux permet d’isoler certaines populations selon les critères analysés (morphologie, fluorescence).

Le MACSQuant Tyto Cell Sorter repose sur une technologie de tri dans un circuit complètement fermé basée sur des puces électroniques commandant une valve. Dans les trieurs classiques par gouttelettes, les particules sont chargées électriquement et soumises à de hautes pressions (entre 10 et 70 psi (pound per square inch)) puis rapidement dépressurisées après le tri. Ces opérations peuvent être stressantes pour les cellules, pouvant compromettre leur viabilité et/ou leur fonctionnalité. Les trieurs basés sur des puces électroniques à valve permettent de faire le tri dans des conditions plus respectueuses de la physiologie des cellules (faible pression < 3 psi). De plus, un dispositif permet de contrôler la température (entre 4 et 25°C). Ces trieurs sont donc particulièrement avantageux pour trier des éléments fragiles comme des parasites à certains stades ou des cellules particulièrement sensibles pouvant s’activer lors des tris par gouttelettes.

L’impact des biais techniques liés à la manipulation des échantillons est donc réduit par cette technologie de tri, la fonctionnalité des cellules est mieux préservée, promettant de meilleurs résultats lors de remises en culture et pour des études génomiques. La préservation de la viabilité des cellules triées est également un atout pour pouvoir trier séquentiellement plusieurs populations sur un même échantillon en repassant la fraction négative sur le trieur plusieurs fois.

Par ailleurs un élément essentiel de ce trieur est que le tri s’effectue dans un circuit complètement fermé sans liquide de gaine. Ce dispositif permet de prévenir toute contamination de l’échantillon par l’environnement extérieur et inversement, que l’échantillon ne contamine l’environnement, il permet également d’éviter les contaminations croisées entre échantillons. Le tri se réalisant en conditions stériles, ce trieur est donc parfaitement adapté pour remettre en culture les éléments triés et ce, pour des temps de culture importants. Il permet également de trier des suspensions avec un risque biologique associé sans contaminer l’instrument. Un autre avantage est que les échantillons peuvent être mis en suspension dans le milieu de culture qui leur est adapté, et collectés également dans ce même milieu. Cela peut s’avérer avantageux pour des échantillons particulièrement sensibles. Les bactéries anaérobies peuvent également être triées en déposant de l’huile minérale au-dessus de la suspension dans la chambre d’entrée et dans les chambres de sorties.

Le trieur dispose de 4 lasers (405, 488, 561 et 638 nm) pouvant permettre d’analyser les paramètres de morphologie (taille et granulosité) et de collecter les signaux de plusieurs détecteurs fluorescents ce qui offre un panel de critères de fluorescence pour effectuer les tris pour des applications satisfaisant l’ensemble des utilisateurs potentiels de l’appareil. Dans une cartouche, entre 100µL et 10mL d’échantillon peuvent être déposés à une concentration maximale de 50 millions cellules/mL, et le tri s’effectue à une vitesse pouvant aller, à raison de 4 mL par heure (55 000 cellules/seconde) à une pression < 3 psi. Un autre type de cartouche permet de trier 2 fois plus vite mais à une pression plus forte (<18 psi). En plus, un nouveau type de cartouche, qui sera bientôt commercialisé, permettra de trier simultanément 3 populations avec 3 chambres de collecte en sortie.