Le GentleMacx Octo Dissociator est un instrument de paillasse pour la dissociation semi-automatique des tissus en suspensions unicellulaires ou en homogénats complets et permet de standardiser la préparation de cellules ou noyaux en suspension. La technologie gentleMACS permet une dissociation entièrement automatisée des tissus dans un système fermé et stérile afin de générer des lysats de tissus ou des suspensions unicellulaires à viabilité élevée et de préserver les épitopes de surface. Grâce à une alternance unique de temps d'incubation entre la digestion enzymatique et la rupture mécanique, l'activité enzymatique et les forces de cisaillement sont réduites au minimum. Cela fait de la technologie gentleMACS la méthode la plus douce et la plus pratique pour une dissociation tissulaire standardisée et reproductible.

Dissociateur de tissus : optimisation et standardisation de la préparation des échantillons

Afin d’obtenir des suspensions cellulaires de bonne qualité et de garantir la standardisation des protocoles, le dissociateur de tissus gentleMAC Octo Dissociator with Heaters (Miltenyi Biotech) est un petit équipement nécessaire en amont du trieur de cellules. L’appareil est conçu pour effectuer des dissociations mécaniques et enzymatiques. Equipé de modules de chauffage ou de refroidissement, il permet d’effectuer une digestion enzymatique à une température définie en même temps que la dissociation mécanique. Il peut traiter jusqu’à 8 échantillons en parallèle ou indépendamment. Des programmes personnalisés peuvent être créés pour optimiser les protocoles selon les différents types de tissus/espèces. La dissociation mécanique se fait par brassage dans des tubes spéciaux. Chaque tube étant à usage unique, il n’y a pas de contamination croisée entre échantillons et la dissociation de tissus avec un risque biologique associé sera possible dans le laboratoire L2 mis à disposition par la plateforme.

Ce dissociateur de tissus permettra d’optimiser les protocoles de dissociation et de garantir l’obtention de suspensions cellulaires viables ou de noyaux de façon reproductible. Pour les applications de génomiques, le temps entre l’obtention de la suspension cellulaire et la fabrication des banques doit être minimisé, la mise à disposition de cet équipement par la plateforme sera donc un atout pour proposer un ensemble d’équipement permettant d’optimiser la qualité des échantillons pour des applications de génomique en cellules uniques.

           Les analyseurs MACSQuant sont des cytomètres en flux multicolores avec plusieurs fonctions automatisées, de l'entretien à l'analyse standardisée. Leur configuration facile aide à la compensation manuelle. Ils peuvent également réaliser une compensation entièrement automatisée et sans intervention humaine.

MacsQuant 16 Analyzer, cytomètre en flux analyseur de cellules : un phénotypage avec une quantification absolue, une flexibilité des paramètres et du débit

Le principe de la cytométrie en flux consiste à mesurer des propriétés physiques et chimiques de particules (cellules, bactéries, parasites, billes…) dans une suspension guidée dans un flux laminaire assurant leur passage une à une devant des faisceaux lasers. Des paramètres de morphologie, dont la taille des cellules (paramètre FSC) et la granularité (paramètre SSC), sont mesurés. La fluorescence des particules, intrinsèque ou résultant d’un marquage préalable par des sondes ou des anticorps fluorescents est également détectée. La cytométrie en flux permet donc de phénotyper certaines populations selon les critères analysés.

 Le MACSQuant Analyzer 16 (Miltenyi Biotec) dispose de 3 lasers - 405 nm (violet), 488 nm (bleu) et 640 nm (rouge) – et des détecteurs de signaux permettant de mesurer 2 paramètres de morphologie (FSC et SSC), ainsi que 14 paramètres de fluorescence :

• 6 paramètres de fluorescence après excitation par le laser bleu (détecteurs 525/50, 579/34, 615/20, 667/30, 725/40 et 785/62 nm)
• 3 paramètres de fluorescence après excitation par le laser rouge (détecteurs 667/30, 725/40 et 785/62 nm)
• 5 paramètres de fluorescence après excitation par le laser violet (détecteurs 450/50, 525/50, 579/34, 615/20 et 667/30 nm).

Sa vitesse d’acquisition peut aller jusqu’à 15 000 évènements par seconde. Il permet d’obtenir une numération absolue et peut donc servir de compteur. Il dispose d’un passeur automatique pour une large gamme de formats de tubes ou plaques (tubes FACS de 5mL, tubes de 1,5mL, 2mL, 15mL ou 50mL ou plaques 96 puits). Il permet également de remettre en suspension les particules par refoulement/aspiration, et certains marquages peuvent être automatisés grâce à un pipetage automatique. Lors des analyses, les cellules peuvent être maintenues à température (4°C-37°C) grâce à des racks spéciaux pré-incubés aux températures désirées. Avec ce cytomètre analyseur, il sera également possible de procéder à un pré-enrichissement de cellules cibles marquées par des billes magnétiques avant de les analyser grâce à une colonne pour billes magnétiques, pré-enrichissement qui peut être de grand intérêt pour étudier des populations cibles très rares.