Coupes de tissus (microtome, cryostat)

Coupes au microtome pour les tissus inclus en paraffine

Cette étape permet la réalisation de coupes fines du tissu qui sont ensuite déposées sur une lame de verre.

La confection de coupes de tissu inclus en paraffine nécessite l’utilisation d’un microtome muni d’un rasoir dont la manipulation et l’entretien doivent être réalisés avec soin. Le plateau d’histologie dispose de deux microtomes à lames jetables (2245/LEICA et 2255/LEICA).  Le microtome permet de réaliser des coupes de 2 à 25 μm d’épaisseur (5µm en standard) autorisant l’observation au microscope. On obtient des rubans de paraffine dans lesquels un ou plusieurs échantillons sont choisis et étalés sur une lame de verre.

Les coupes de tissu inclus en paraffine peuvent être utilisées :

• directement (on parle de lames blanches) pour l’immunohistologie par ex ; on utilise alors des lames de verre spécialement traitées pour accroitre l’adhésion des tissus
• ou pour des  colorations  classiques (HES) ou spécifiques (red oil, PAS…) ; on utilise dans ce cas des lames de verre non traitées

Le plateau dispose d’une imprimante de lames (Signature/Microm Microtech) qui permet d’imprimer automatiquement de façon pérenne toutes les caractéristiques des échantillons (décrits par l’utilisateur dans un tableau Excel) sur la lame de verre avant dépôt des coupes.

Equipements associés : Signature (Microm Microtech) : Imprimante de lames, Varistain (Thermo Electron)

Coupes au cryostat pour les tissus congelés

La congélation (abaissement brutal de la température à ‐20°C ou plus) empêche l'autolyse. La confection de coupes de tissu congelé nécessite l’utilisation d’un cryostat (THERMO Shandon). Les tissus doivent être enrobés dans un composé (gel O.C.T.) qui est sous forme de gel à température ambiante et devient dur en dessous de -10°C.

Cette technique de fixation qui solidifie les tissus permet de réaliser des coupes très minces comme pour les tissus enrobés en paraffine. La fixation par congélation permet de préserver l’ADN/ARN et une antigénicité excellente des tissus mais aux dépens de leur morphologie.

Equipements associés : Reichert Cryotome 150, MM France Cryostat NX 50, Signature (Microm Microtech) : Imprimante de lames, Varistain (Thermo Electron)